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用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物

时期:2021-05-17 01:51 点击数:
本文摘要:蛋白糖基化是生命系统十分最重要的译成后标记之一,在免疫系统系统辨识,蛋白质粘液,信号转导等性命全过程中充分运用了最重要具有。与蛋白质联接的多聚糖是这种作用的最重要媒介,尤其是针对单抗药品,多聚糖一部分对药品的生物活性具备最重要的危害。因而,发展趋势提取高效率,检验敏感度好的糖基化统计分析方法对单抗药物检测具有十分最重要的实际意义。 对于糖基化剖析中的诸多艰辛,沃特世企业产品研发了亲水性具有色谱分析,及其莹光-质谱分析结合检验的统计分析方法。

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蛋白糖基化是生命系统十分最重要的译成后标记之一,在免疫系统系统辨识,蛋白质粘液,信号转导等性命全过程中充分运用了最重要具有。与蛋白质联接的多聚糖是这种作用的最重要媒介,尤其是针对单抗药品,多聚糖一部分对药品的生物活性具备最重要的危害。因而,发展趋势提取高效率,检验敏感度好的糖基化统计分析方法对单抗药物检测具有十分最重要的实际意义。

  对于糖基化剖析中的诸多艰辛,沃特世企业产品研发了亲水性具有色谱分析,及其莹光-质谱分析结合检验的统计分析方法。ACQUITYUPLC系统软件顺应莹光探测器(FLR)及其多聚糖剖析专用型(GST)色谱柱,比HPLC方式有高些的提取度。多聚糖剖析专用型色谱柱填弹了1.4m的氟苯吸收剂,可在HILIC方式下合理地提取莹光标记的多聚糖。

UPLC顺应莹光探测器剖析多聚糖能够获得很高的提取度和定量分析精确性,尤其是针对方向同分异构体及其有共注入的小涛剖析;而质谱检测为糖链检测获得了更为多的构造信息内容。根据与规范糖链享有時间的比较,该步骤能搭建高通量测序的多聚糖判定定量分析,合乎药物检测的多种多样市场的需求。

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  一、色谱仪标准与标记后的多聚糖试品的提取  可根据HILIC方式,合理地提取2-AB标记的多聚糖化合物。针对方式提升,用于更缓的较宽梯度方向,可合理地提高享有時间上相互之间相邻的多聚糖峰中间的提取度;针对其他的主要参数,如水流量、缓冲溶液浓度值、流动性相互之间pH及柱温等,一般也务必进行提升。图1实例用于提升后的HILIC色谱仪标准后,简易的2-AB标记的IgG多聚糖化合物得到 了非常好的提取,还包含E1/E2与F1/F2。

试验常用梯度方向刷洗時间为45分钟,还包含色谱柱消除和再作平衡流程。一般来说,一个试品的总剖析時间在1小时内。因而,与用于3.0-m填料的HPLC方式相比,用于1.7-m填料的UPLC色谱仪方式,不仅提取实际效果更优,并且运作時间更为较短。试验中用于2.1x150mm色谱柱。

图1(B)中甘露糖5(峰C)与甘露糖6(峰H)可与周边多聚糖峰成功提取,解决困难了总共注入的难题。


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